试验单位：福建医科大学药理教研组

                试验设计：黄自强教授

                试验负责人：黄自强、许建华、潘炳芳

                试验时间：1991年6月5日一1993年6月30日

        原始资料保存处：福建医科大学药理教研室  

荷瘤鼠I·g(灌胃)，慈丹胶囊(原名神州消瘤胶囊)0.4－1.6g／kg，每日1次，对S₁₈₀，和V₁₄和Lewis肺癌在体生长抑瘤率最高分别可达62．89％，56．22％和49．73％，并具有较好的重现性。对黑色素瘤的抑制率达21．23～41．34％，对免疫机能单用无明显影响，与西药CTX联用时，未见加重后者的免疫抑制，且有所缓解。

关键词：慈丹胶囊S₁₈₀ U₁₄ Lewis肺癌  黑色素细胞瘤免疫  小鼠

药物：慈丹胶囊(简称慈丹)0. 2 7g／粒，由福州伟达中医肿瘤防治研究所提供，批号，临用前以水配成相应浓度悬液。

动物：ICR纯系小鼠和C₅₇纯系小鼠分别购自上海sipp-BK实验动物供应有限公司(清洁级)和中科院上海药物研究所并饲养于本院基础部动物实验室(普通级,闽医动条           0007)。

(一)抗癌作用

　　1．鼠S₁₈₀：取ICR纯系小鼠每批50只，21±3％，性别相同。按体重随机分为5组，每组10只。其中3组做为治疗组，于接种瘤块前3日分别给予慈丹悬液4﹪、2％和l％～0.4ml／10g，灌胃(Ig)，每日一次(qd)，连续10日。一组为阳性对照组，于接种S_l80的第3、5日分别ig环磷酰胺(CTX)50mg／kg各一次。另一组为阴性对照组，以水0.4ml／10g代药ig。疗程结束次晨将小鼠处死，剖瘤称重，按下式计算抑瘤率(％)：

 

                   阴性对照组平均瘤重一给药组平均瘤重

    抑瘤率(％)=                                      × 100％

 

                        阴性对照组平均瘤重

重复三批试验的结果见表1。

表 1  慈丹胶囊对S₁₈₀的抑瘤效果(n=10)

批     组              药物                 瘤重                平均抑瘤率           P值 别     别               (ig)               (g ,X±SD)                 (﹪)

1              ———             2.294±0.519              ———            ——— 2         CTX50mg/kg×2          0.984±0.377               57.11             <0.001 I      3         慈丹1.6g/kg×12         0.992±0.219                56.68            <0.001 4         慈丹0.8g/kg×12         1.461±0。464              36.31             <0.01 5         慈丹0.4g/kg×12         1.879±0.546                18.09            <0.05

1              _____              4.089±0.743               _____           _____        2          CTX50mg/kg×2          1.656±0.92                59.50           ＜0.001 Ⅱ     3         慈丹1.6g/kg×12         1.517±0.702               62.89           ＜0.001        4         慈丹0.8g/kg×12         2.012±0.683              50.79           ＜0.001        5         慈丹0.4g/kg×12         2.608±0.611              36.22           ＜0.001

1             _____               4.97±0.743                _____           _____        2         CTX50mg/kg×2         1.582±0.792               68.21          ＜0.001        3         慈丹1.6g/kg×12         2.319±0.54                53.34          ＜0.001 Ⅲ     4         慈丹0.8g/kg×12         2.66±0.486                46.48          ＜0.001        5         慈丹0.4g/kg×12        3.367±0.685               32.25          ＜0.001

  

　　表1提示，三批荷瘤鼠整体试验均表明，慈丹胶囊0.4～1.6g／kg，接种S₁₈₀前三天，接种后9天连续Ig12天确有显著抑制瘤块增长作用，其中，大剂量组的抑瘤率三批分别为53.34；56.68以及62.89％，与阴性对照组比较差异在统计学上有非常显著意义P＜0.001。

　　2．小鼠子宫颈癌U₁₄：分组和给药剂量与S₁₈₀试验相似，但是疗程延长2天，接种瘤块后继续给药11天，次晨剖取瘤块称重统计，结果见表2。

　　从表2可见，慈丹胶囊对U₁₄瘤重增长有非常显著的抑制作用，其中，大剂量组抑瘤率达50.4～56.22％(P＜0.001)，小剂量组的最低抑瘤达28.31％(P＜0.01)。试验重复性也较好。

　　3．小鼠Lewis肺癌：取C₅₇纯系小鼠(雄)50只，18.5±1.5g。随机分为5组，每组10只，按常规给每鼠左腋下接种Lewis肺癌小块后阳性对照组于。d1.5各igCTX50mg／kg一次，治疗组每日分别ig·0.4:0.8和1.6g/kg,连续10日，阴性对照组只ig水0.4ml／10g．d₁₂处死所有小鼠，剖取瘤块称重进行统计，结果见表3。

　　表3提示，慈丹对小鼠Lewis肺癌的生长有显著的抑制作用,剂量 0.4～1.6g／kg连续ig10日，抑瘤率达20.77～49.73％，在统计学上均有显著意义。

　　4．黑色素瘤：雌性C₅₇纯系小鼠50只，19±2.0g，随机分为5组，每组10只，分组给药情况与Lweis肺癌相似，但是疗程延长至接种肿瘤后20天，并于第21天剖取瘤块称重，结果见表4。

 

 

 

表2  慈丹胶囊对U₁₄的抑瘤效果(n=10)

批  组              药物                     瘤重                   平均抑瘤率              P值 别  别              (ig)                     (g ,X±SD)                  (﹪)

1              ___                    3.18±0.765                   ___                  ____ 2          CTX50mg/kg×2             1.228±0.503                 61.38              ＜0.001 Ⅰ  3          慈丹1.6g/kg×14             1.339±0.443                56.00              ＜0.001 4          慈丹0.8g/kg×14             2.053±0.226                35.53              ＜0.001 5          慈丹0.4g/kg×14             2.24±0.816                 29.56              ＜0.05

1             ____                    2.121±0.343                  ____                ____     2         CTX50mg/kg×2             0.708±0.232                 66.62              ＜0.001 Ⅱ  3         慈丹1.6g/kg×14            1.052±0.542                  50.4               ＜0.001     4         慈丹0.8g/kg×14            1.18±0.285                  44.38               ＜0.001     5         慈丹0.4g/kg×14            1.52±0.458                  28.31               ＜0.01

1           ____                     4.749±0.493                   ____                ____     2        CTX50mg/kg×2             1.252±0.288                  74.58              ＜0.001 Ⅲ  3        慈丹1.6g/kg×14             2.079±0.571                  56.22             ＜0.001 4        慈丹0.8g/kg×14            2.659±0.651                  44.00             ＜0.001 5        慈丹0.4g/kg×14            2.863±0.527                  39.72             ＜0.001

表 3  慈丹对小鼠Lewis肺癌的抑制作用(n=10)

　　从表 l～4可见，在整体试验中，慈丹对实体瘤 S₁₈₀，U₁₄，Lewis肺癌以及黑色素瘤等小鼠恶性肿瘤模型，在剂量0.4～1.6g/kg连续应用时，有明显的抑瘤作用。

对腹水型瘤株，选用小鼠艾氏腹水瘤和腹水型肝癌，以生命延长率等指标验证慈丹胶囊的疗效。结果表明，本品对这二种模型均无明显抑癌作用。

　　5．体外抑癌试验：分别采用台阶盼兰排染法和中性红活染法对悬浮培养和贴壁生长的4种人癌细胞进行观察，计算半数抑制浓度(TC₅₀)，结果见表5，实验前液经除菌漏斗(孔径0.22μ)过滤，取滤液加入微孔板，每孔 0.18ml培养液加 2μ1药液(对照组加灭菌生理盐水)，每个剂量组 3孔，与药物接触24小时后计算抑制(％)，并按直接回归法求IC₅₀。

表 5  慈丹胶囊对4种人癌细胞的仰制作用

                 K₅₆₂        HL₆₀        FGC₈₅          SMMC₇₇₂₁

注: K₅₆₂人慢性粒细胞白血病；HL₆₀人早幼粒白血病；FGC₈₅。人胃低分化粘液腺癌；SMMC₇₇₂₁人肝癌细胞株。

表5提示，慈丹胶囊的除菌滤液对所试的人胃癌，肝癌以及白血病细胞的生长具有一定的直接的抑制作用。结合在体抑瘤试验的疗效，可以认为，慈丹胶囊确有较可靠的抗癌苗头，值得深入研究。

(二)对小鼠血液白细胞计数和免疫器官重量的影响

　　ICR纯系雄鼠50只，17.5～19g，随机分为5组，每组10只，按表6所示给药10日，并于末次给药后1小量眼眶取血检查白细胞计数，然后剖取胸腺和脾称量，计算胸腺和脾指数(mg／g体重)。

　　阳性对照药环磷酸胺(CTX)每日灌胃(Ig)一次，第1和5日各一次，50mg／kg。阴性对照组以水代药。

表6  慈丹胶囊对小鼠白细胞、胸腺、脾的影响(n=10)

   *P＜0．05    …＜0.001，与组2比较

　　从表6可见，单用慈丹胶囊对小鼠血液白细胞数，胸腺和脾指数均无明显抑制，而阳性对照药磷酰胺则显著抑制上述三个指标。当联合应用二药时，上述抑制作用减轻，其中胸腺指数和脾指数与单用环磷酰胺比较有明显提高(P值分别为＜0.05和＜0.001)。

(三)碳粒廊清试验

　　雄性ICR纯系小鼠50只，18—23%，随机分为5组，每组10只，按表7所示连续给药8天，于末次给药后1小时，尾静脉注射胶体碳溶液(1.6％～0.lml／10g)，分别经1和5分钟取血20μl,加入0.1％Na₂CO₃  2ml中静置6小时，放入721分光光度计测 OD值，计算 K值(廓清指)，结果见表7。

 

 

表 7  慈丹胶囊对小鼠碳廓清率的影响(n=10)

　　从表7可见，对小鼠碳粒廓清率，CTX明显抑制而慈丹胶囊没有显著效应。联用CTX和慈丹胶囊，碳粒廓清率比单用CTX虽然有所提高，但统计学上差异无显著意义(P＞0.05)。

(四)小鼠血清溶血素形成试验

　　ICR纯系小鼠(雄)50只，17～20g，随机分为5组，每组10只给药方案同表7，于给药第三天每鼠腹腔注射10％SRBC0.2ml免疫，阳性对照组从免疫次日起给予CTXig5天。各组于末次给药后1小时眼眶取血，分离血清，并以生理盐水300倍稀释，取稀释的血清，5％SRBC和10％豚鼠血清各0.5ml混匀，空白对照管以生理盐水代血清。37℃温育30分钟后离心5分钟，取上清液测OD550，

 

                        样品OD值

    半数溶血素HC₅₀=                  血清稀释倍

                      半数溶血 OD值

 

计算各管溶血素浓度。结果见表8。

 

表8  慈丹胶囊对小鼠血清溶血素形成的影响(n=10)

　　实验结果表明，CTX显著抑制血清溶血素的生成，而慈丹胶囊无明显影响。二药合用时，血清溶血素的生成有明显改善(P＜0.001)，但是与正常组成或单用慈丹胶囊组比较，其抑制作用仍然存在(P＜0.001)。

    (五)迟发超敏反应(DTH)

　　ICR纯系小鼠(雄)50只，18～21g，随机分为5组，每组10只，按表9所示剂量治疗组予先药(ig)3天，然后给所有受试鼠左后足垫皮下注射10％SRBC 50μl免疫。治疗组继续给药8天，阳性对照组igCTX20mg／km5天。免疫后第8天，于末次给药后1小时再以10％SRBC左后足垫注射攻击，用千分卡测量攻击前以及攻击后6小时左后足垫的厚度，并以二者之差值为指标进行统计，结果见表9。

　　结果显示，CTX对DTH反应显著抑制，而慈丹胶囊无明显影响。二者合同抑制作用无明显加重，反而有所缓解(P＜0.001)。

表9  慈丹胶囊对小鼠DTH的影响(n=10)

(六)植物凝血素诱导的脾淋巴细胞增殖

    取ICR纯系小鼠40只(雄)，18～21g，随机分为5组，每组8只，按表10所示连续ig慈丹胶囊10天，于末次给药后1小时处死，在无菌条件下取一小块脾组织于Hank’s液中，用玻璃匀浆器制成匀浆，过滤后混悬于含肝素6IU／ml，青霉素100IU／ml，链霉素100IU／ml，0 03％谷胺酰胺及10％小半血清的  RPMll640溶液中，调整细胞浓度为2×10⁷／ml，每管加入细胞悬液2m1，PHA100μg／ml，塞紧管口，于 37℃培养48 小时，加入 H⁸－TDRIUDI／ml后继续培养 24 小时。离心取出清液，加入生理盐水冲洗，再以2％三氯醋酸。9 5％乙醇，乙醚溶液等抽滤后，在6 0℃烘干。加入含5ml闪烁液的瓶中，以液闪法测CPm值，结果见表10。

表 10  慈丹胶囊对脾淋巴增殖的影响(n=8)

表10提示，阳性对照药CTX显著抑制PHA诱导的脾淋巴细胞增殖作用，而慈丹胶囊则不然，二药联合应用时，抑制作用没有加重，反而有所缓解，但统计学上差异无显著意义。

　　综上所述，慈丹胶囊无论在离体试验或在体荷瘤鼠试验均具有较明显的抗癌作用，其中，对S₁₈₀的最高抑制率曾达62．89％与此同时，该药不抑制机休的免疫功能，与西药抗癌剂CTX联合应用时，不仅不会加重CXT的免疫抑制和白细胞减少症而且使这二种不良反应有不同程度的缓解，具有较好的开发前景。

                                  参考文献

    1、杨金龙  抗癌活性微量测定技术讲义，1987

    2、鄂  征  组织培养技术第二版,北京，人民卫生出版社,1988，100－75

    3、徐叔云、卞如濂、陈修主编，药理实验方法第二版，北京，人民卫生出版社，

                    1991，1423～1464

       试验设计者：黄自强

    试验负责人、参加者：黄自强  许建华  潘炳芳

    试验时间：1991年6月5日～1993年6月30日

    原始资料保存处：福建医科大学药理教研室

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